聚丙烯酰胺凝胶电泳的注意事项

· 聚丙烯酰胺凝胶必须由丙烯酰胺单体、聚合原料、催化剂、以及合适的盐和缓冲剂混合在一起。

· 丙烯酰胺BIS（N，N'-亚甲基双丙烯酰胺）是形成凝胶基质的单体。

· 过硫酸铵启动粘合剂聚合过程。胶水的配方需要用水配制10%的过硫酸铵溶液。大多数信息表明需要积极使用。然而，10%的溶液可以在4℃下放置数周而没有明显的活性损失。配制至 10 毫升，当胶水无法聚集时丢弃。

提示：百分比丙烯酰胺在测序胶和蛋白胶上是不一样的。如果使用预制丙烯酰胺：BIS 溶液，请确保使用正确的瓶子。

· TEMED（N,N,N',N'-四甲基乙二胺）是一种催化剂，装在棕色瓶子里，放在冰箱里。在浇注胶水之前添加。

· 聚丙烯酰胺电泳所用玻璃在每次电泳前后均应清洗。电泳后，用软刷和布在热肥皂水中清洗，用蒸馏水冲洗并静置晾干。

· 湿气和灰尘会导致空心聚合物。电泳前，用玻璃清洁剂清洁玻璃板，并用软刷擦拭。用蒸馏水清洗并用纸巾彻底擦干。在用纸擦拭之前用70%乙醇冲洗有助于清洁并加速干燥。依次加入丙烯酰胺样品：BIS、水、缓冲溶液、过硫酸铵、TEMED。摇匀并立即倒入。

聚合前不需要对聚丙烯酰胺进行脱气。 （丙烯酰胺过去被放置在真空中以除去气泡，因为氧气会抑制聚合。）

水平胶点样品尖端。

· 在底盒内放一张黑纸，黑色背景，打一些样品孔，以便看得更清楚。
· 胶槽内充满缓冲液，刚好超过胶体。
·如果边缘有灯，则打开灯，让灯光照射到胶体上。将样品吸入移液器中。
·采用自动移液装置。
·在10-200μ1液体移动点可用于样品上的大部分点。对于非常小的样品孔（小于10μ1），测序胶使用的长移液头更为方便。

·移液时只需浸入样品中，吸入缓慢移动的液体。样品可能因甘油而显得粘稠，快速泵送可能会将气泡吸入移液器头中。

·样本吸入移液头后，将移液头轻轻放在管道边缘或用纸吸去液头外面的液滴。小心不要吸取样品。

将样品放入样品孔中

· 移液装置保持少许压力，使样品轻微移动溢出液头。
· 将移液头插入缓冲器，略高于点孔，保持正压。移液器的尖端可以插入小孔中。
· 缓慢而稳定地取出样品。将移液器吸头置于点样孔上方，样品将沉入孔中。让样品下沉以充满样品孔而不是推入。
· 一旦最后一滴样品与液体头接触，液体就会移动到第二个腿，慢慢抬起液体移动，移出缓冲液

如何进行垂直胶水取样？

· 两片玻璃之间形成的垂直胶点样品孔。在非常稀的胶水中，移液器头甚至无法插入两块玻璃板之间。注意甘油！将移液器头放在样品孔上，样品就会沉入孔中。
·点样前，务必将聚丙烯酰凝胶垂直点样孔冲洗干净。洗掉未聚合的丙烯酰胺和可能出现在样品孔底部的水。水可以使样品孔显着变小。使用 25 毫升或 50 毫升注射器和 18 号针头。倒入电泳缓冲液并小心冲洗样品孔。
· 看到样品孔可能很困难，但同时，其余的很容易。如果有多余的孔，可以用溴酚蓝测试样品缓冲液。