聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项

· 聚丙烯酰胺凝胶必须由丙烯酰胺单体、聚合起始原料、催化剂、以及合适的盐和缓冲液混合而成。

· 丙烯酰胺并以BIS（N，N'-亚甲基双丙烯酰胺）为单体形成凝胶基质。

· 过硫酸铵启动胶粘剂聚合过程。配制此胶粘剂需要用水配制10%过硫酸铵溶液。大多数信息表明需要活性使用。然而，10%溶液可在4℃下放置数周，活性不会显著降低。配制至10毫升，当胶粘剂无法聚集时丢弃。

提示：丙烯酰胺测序胶和蛋白胶的用途不同。如果使用预制的丙烯酰胺：BIS溶液，请务必选择正确的瓶子。

· TEMED（N，N，N'，N'-四甲基乙二胺）是一种催化剂，装在棕色瓶中，置于冰箱中。在灌胶前加入。

· 聚丙烯酰胺电泳所用的玻璃每次电泳前后都应清洗。电泳结束后，用软刷和布在热肥皂水中清洗，再用蒸馏水冲洗，静置晾干。

· 湿气和灰尘会损坏空心聚合物。电泳前，用玻璃清洁剂清洁玻璃板，并用软刷擦拭。用蒸馏水冲洗，并用纸巾彻底擦干。用纸巾擦拭前，先用70%乙醇冲洗，有助于清洁并加快干燥速度。依次加入丙烯酰胺样品：BIS、水、缓冲液、过硫酸铵、TEMED。摇匀后立即倒出。

聚丙烯酰胺聚合前无需脱气。（由于氧气会抑制聚合，丙烯酰胺过去通常需要置于真空环境中去除气泡。）

水平胶点样品提示。

· 在底盒内放一张黑纸，黑色背景上打一些样品孔，以便看得更清楚。
· 胶槽内充满缓冲液，刚好覆盖胶体。
· 如果边缘有灯，打开灯，让灯光照射胶体。将样品吸入移液器。
·采用自动移液装置。
· 在10-200μ1范围内的液体移动点可用于样品上的大部分点位。对于非常小的样品孔（小于10μ1），使用测序胶的长移液器头更为方便。

· 移液器仅浸入样品中，吸入缓慢流动的液体。样品可能因甘油而显得粘稠，快速抽吸可能会将气泡吸入移液器头。

· 将样品吸入移液头后，将移液头轻轻放在管子边缘或用擦拭纸吸去移液头外部的液滴。注意不要吸入样品。

将样品放入样品孔

·移液器保持少许压力，使样品略微移出溢液头。
· 将移液头插入缓冲液中，略高于点样孔，保持正压。移液器尖端可插入小孔。
· 缓慢而稳定地将样品抽出。将移液器吸头置于样品孔上方，样品会沉入样品孔。让样品下沉以填充样品孔，而不是将其推入。
· 一旦最后一滴样品与液体头接触，液体将移动到第二支腿，缓慢抬起液体移动，移出缓冲液

垂直胶水取样如何做？

· 两片玻璃之间形成的垂直胶点样品孔。如果胶水很稀，移液器头甚至无法插入两片玻璃板之间。小心甘油！将移液器头放在样品孔上，样品就会沉入孔中。
· 点样前，务必将垂直点聚丙烯酰胺凝胶的上样孔冲洗干净。冲洗掉未聚合的丙烯酰胺和上样孔底部可能出现的水分。水分会使上样孔明显变小。使用25ml或50ml注射器和18号针头。倒入电泳缓冲液，小心冲洗上样孔。
· 上样孔可能难以看到，但其余部分很容易。如果孔过多，可以用溴酚蓝检测上样缓冲液。